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補體C3 ELISA 試劑盒

注意事項

1.   從2-8℃取出的試劑盒，在開啟試劑盒之前要室溫平衡至少30分鐘。酶標包被板開封后如未用完，板條應裝入密封袋中保存。

2.   各步加樣均應使用加樣器，并經(jīng)常校對其準確性，以避免試驗誤差

3.   建議所有標準品、樣本都做雙份檢測。

4.   嚴格按照說明書的操作進行，試驗結果判定必須以酶標儀讀數(shù)為準.

5.   為避免交叉污染，要避免重復使用手中的吸頭和封板膜。

6.   不用的其它試劑應包裝好或蓋好。不同批號的試劑不要混用。保質(zhì)前使用。

7.   底物B對光敏感，避免長時間暴露于光下。

補體C3 ELISA 試劑盒

用于標記抗體或抗抗體的酶須具有下列特性：有高度的活性和敏感性；在室溫下穩(wěn)定；反應產(chǎn)物易于顯現(xiàn)；能商品化生產(chǎn)。當前應用較多的有辣根過氧化物酶（HRP）、堿性磷酸酶、葡萄糖氧化酶等，其中以HRP應用廣。 

過氧化物酶

過氧化物酶廣泛分布于植物中，辣根中含量高，從辣根中提取的稱辣根過氧化物酶（HRP），是由無色酶蛋白和深棕色的鐵卟啉構成的一種糖蛋白（含糖量18%），分子量約40 000，約由300個氨基酸組成，等電點為pH 3-9，催化反應的適pH值因供氫體不同而稍有差異，一般多在pH 5左右。此酶溶于水和50%飽和度以下的硫酸銨溶液。酶蛋白和輔基的大吸收光譜分別為275nm和403nm。

酶的純度以RZ表示：RZ=OD403/OD275

純酶的RZ多在3.0以上，高為3.4。RZ在0.6以下的酶制品為粗酶，非酶蛋白約占 75%，不能用于標記。RZ在2.5以上者方可用于標記。HRP的作用底物為過氧化氫，催化反應時的供氫體有幾種：（1）鄰苯二胺（OPD），產(chǎn)物為橙色，可溶性，敏感性高，大吸收值在490nm，可用肉眼觀察判別，容易被濃H2SO4終止反應，顏色可在數(shù)小時內(nèi)不改變,是目前國內(nèi)ELISA中常用的一種；（2）聯(lián)大茴香胺（OD）,產(chǎn)物為橘黃色，大吸收值在400nm，顏色較穩(wěn)定；（3）5－氨基水楊酸（5－AS）：產(chǎn)物為深棕色，大吸收值在449nm，部分溶解，敏感性較差；（4）鄰聯(lián)甲苯胺（OT）產(chǎn)物為藍色，大吸收值在630nm，部分溶解，不穩(wěn)定，不耐酸，但反應快，顏色明顯。